黑龙江久丰生物工程有限公司是专业的哈尔滨生化试剂代理公司,浆膜腔积液检查的内容日益增多,相关的实验技术也不断地提高,从以前化学及显微镜方法鉴别炎症与非炎症发展到用免疫学、生化学等方法鉴别引起浆膜腔积液的良性与恶性肿瘤甚至用液相色谱等手段对肿瘤进行定位检查,实验方法和技术的进步使疾病的诊断更为明确,现代的浆膜腔积液的实验室检查已成为临床疾病诊断的重要手段。常用项目有:(1)新的渗出液与漏出液分类法:包括3个指标:a.胸腹液LDH的比值>0.6。b.胸腹蛋白同血浆蛋白比值>0.5。c.胸腹液IgG,IgA比值>0.5,提示为渗出液,大约90%的胸腹水渗出液显示上述改变。(2)乳酸脱氢酶(LDH)活性测定,主要用于渗出液和漏出液的鉴别。(3)腺苷脱氢酶(ADA)总活性:对结核性积液的诊断有重要参考价值。(4)纤维连接蛋白(fibronectin, FN)对鉴别诊断恶性,非恶性腹水的准确性达100%。恶性腹水FN显著高于肝硬化腹水(P<0.001 )。(5)有人证实胸腔积液中的IBP含量可作为肿瘤性积液与结核性胸膜炎性积液的鉴别诊断指标,胸水中的IBP>1 500 mg/ml,则为肿瘤性积液的可能性较大。(6)经研究证实,有93%结核性胸水患者胸水溶菌酶的含量同血清溶菌酶含量的比值>1.0,而100%恶性胸水患者此比值<1.0。(7)β2-MG蛋白对鉴别结核性积液和非结核性积液有一定的价值。另外风湿性胸腔积液和淋巴瘤并发的胸腔积液中,其含量也会升高,尤以后者zui为显著。但在其它疾病引发的胸腔积液,包括恶性肿瘤和系统性红斑狼疮,其中β2-MG均明显低于结核病、风湿病和淋巴瘤。(8)不同疾病浆膜腔积液中的纤维蛋白降解产物(FDP)含量不同,笔者的资料显示,恶性肿瘤、结核性胸膜炎及腹膜胸腹水的FDP均值水平显著高于肝硬化、肝癌。因此检测胸腹水FDP,可以用作恶性肿瘤、结核与其他疾病诊断和鉴别诊断的指标。(9)炎症时C-反应蛋白(CRP)结果较高,检出率为100%,因为CRP是一种急性期反应蛋白,当由于炎症而导致腹水或胸水形成时,其中CRP含量的检测对炎症的诊断有一定价值。
FCM用于浆膜腔积液检查主要集中在3个方面:DNA含量分析,肿瘤细胞抗原的测定,淋巴细胞的免疫表型分析。
1.DNA含量分析:用FCM进行单个细胞DNA定量,临床上主要用于细胞遗传学和细胞动力学的研究。从分子生物学角度,将增殖周期分为四个阶段,第1阶段为DNA复制前期(G1期)此阶段DNA含量为2N,第2阶段为DNA复制期(S期),此期DNA含量在2~4N之间,一旦DNA含量为4N,即进入G2期,第四阶段为分裂期。因此,FCM DNA定量可将形态上不易区别的群体细胞分成3个群(即G,S和G2期),这3个群体细胞对不同的化疗药物反映不同。因此,细胞动力学的研究可利用药物的选择,疗效的观察及愈后的估计。另外肿瘤细胞多存在染色体的数目变化,也即DNA含量的不同。研究证明肿瘤细胞DNA含量不同,DNA指数的不同与肿瘤恶性程度有关,并可预示某些疾病的愈后。有文献报告,将组织学证明的浅表胃炎,慢性萎缩性胃炎和晚期胃癌细胞做FCM DNA分析结果显示:三者DNA非倍体分别为0(0/10例),20%(2/10例)和90%(36/40例),因此用FCM进行浆膜腔积液内细胞DNA测定屡有报告。Huang等对71例肿瘤患者检测显示,对恶性胸水诊断敏感性为52%,特异性为100%。若与脱落细胞检查联合应用,则可使诊断敏感性达94%,FCM定的S期细胞比例是部分肿瘤的重要预后指标。胸液中非整倍体肿瘤S期比例较二倍体肿瘤比例明显增高。其中位生存期明显缩短,Bartal等还观察了恶性胸水局部治疗前后FCM所显示的胸水细胞DNA倍体特征,发现患者临床症状改善与胸液细胞DNA倍体水平的变化相关,说明倍体分析亦是评价治疗效果的较好指标。Hedley等提示:在细胞学检查阳性的恶性胸腔积液中,含有异倍体细胞的病人愈后差,其中位生存期与那些仅有二倍体细胞的病人相比为1.5∶4。
2.肿瘤细胞抗原的测定:免疫细胞化学研究证实,利用FCM检测上皮膜抗原(EMA),癌胚抗原(CEA),细胞角蛋白(Keratin)等对恶性胸水的诊断及鉴别诊断有一定的价值。Czerniak等将胸液细胞用酒精或甲醛固定后暴露于抗Cal抗原(仅出现于肿瘤细胞)的单克隆抗体液中,然后再与结合了异硫氰酸荧光素(FITC)的羊抗鼠免疫球蛋白,通过FCM检测一定数量细胞的荧光强度,发现14/17例恶性胸腔积液中,荧光强度明显高于对照组,而25例良性胸水液中无一例增强。
3.胸腔液淋巴细胞的免疫表型分析:淋巴细胞特别是T淋巴细胞的某些胸膜疾病中起着非常重要的作用。研究胸腔积液淋巴细胞的表现型,已成为许多专家的焦点。Ainslie等使用FCM证实TB胸水中富集CD4阳性T细胞,其比例与外周血相比有明显升高。胸水中CD4/CD8为3.92,而外周血
FCM用于浆膜腔积液检查主要集中在3个方面:DNA含量分析,肿瘤细胞抗原的测定,淋巴细胞的免疫表型分析。
1.DNA含量分析:用FCM进行单个细胞DNA定量,临床上主要用于细胞遗传学和细胞动力学的研究。从分子生物学角度,将增殖周期分为四个阶段,第1阶段为DNA复制前期(G1期)此阶段DNA含量为2N,第2阶段为DNA复制期(S期),此期DNA含量在2~4N之间,一旦DNA含量为4N,即进入G2期,第四阶段为分裂期。因此,FCM DNA定量可将形态上不易区别的群体细胞分成3个群(即G,S和G2期),这3个群体细胞对不同的化疗药物反映不同。因此,细胞动力学的研究可利用药物的选择,疗效的观察及愈后的估计。另外肿瘤细胞多存在染色体的数目变化,也即DNA含量的不同。研究证明肿瘤细胞DNA含量不同,DNA指数的不同与肿瘤恶性程度有关,并可预示某些疾病的愈后。有文献报告,将组织学证明的浅表胃炎,慢性萎缩性胃炎和晚期胃癌细胞做FCM DNA分析结果显示:三者DNA非倍体分别为0(0/10例),20%(2/10例)和90%(36/40例),因此用FCM进行浆膜腔积液内细胞DNA测定屡有报告。Huang等对71例肿瘤患者检测显示,对恶性胸水诊断敏感性为52%,特异性为100%。若与脱落细胞检查联合应用,则可使诊断敏感性达94%,FCM定的S期细胞比例是部分肿瘤的重要预后指标。胸液中非整倍体肿瘤S期比例较二倍体肿瘤比例明显增高。其中位生存期明显缩短,Bartal等还观察了恶性胸水局部治疗前后FCM所显示的胸水细胞DNA倍体特征,发现患者临床症状改善与胸液细胞DNA倍体水平的变化相关,说明倍体分析亦是评价治疗效果的较好指标。Hedley等提示:在细胞学检查阳性的恶性胸腔积液中,含有异倍体细胞的病人愈后差,其中位生存期与那些仅有二倍体细胞的病人相比为1.5∶4。
2.肿瘤细胞抗原的测定:免疫细胞化学研究证实,利用FCM检测上皮膜抗原(EMA),癌胚抗原(CEA),细胞角蛋白(Keratin)等对恶性胸水的诊断及鉴别诊断有一定的价值。Czerniak等将胸液细胞用酒精或甲醛固定后暴露于抗Cal抗原(仅出现于肿瘤细胞)的单克隆抗体液中,然后再与结合了异硫氰酸荧光素(FITC)的羊抗鼠免疫球蛋白,通过FCM检测一定数量细胞的荧光强度,发现14/17例恶性胸腔积液中,荧光强度明显高于对照组,而25例良性胸水液中无一例增强。
3.胸腔液淋巴细胞的免疫表型分析:淋巴细胞特别是T淋巴细胞的某些胸膜疾病中起着非常重要的作用。研究胸腔积液淋巴细胞的表现型,已成为许多专家的焦点。Ainslie等使用FCM证实TB胸水中富集CD4阳性T细胞,其比例与外周血相比有明显升高。胸水中CD4/CD8为3.92,而外周血