尼龙毛柱

Nylon Fiber * Nylon Wool

　　尼龙毛柱是免疫学中一种用于分离T细胞的分离柱。忧郁在研究体内及体外的免疫系统时，分离淋巴细胞群是一个关键步骤。而市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清，所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力，从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。该方法不像流式和磁珠费用昂贵，而且操作简便，所需要的条件也不高，是一种非常实用的方法。

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　　操作方法：

　　1.称取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或注射器内，填料的体积控制在15毫升左右。因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率，所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。

　　2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用铝箔包裹，并置于适当的容器内，高压灭菌15分钟。

　　（商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略，经过PBS平衡后可以直接进行下列步骤。）

　　3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内，顶部以铝箔覆盖，避免污染。

　　4. 注射器下端，橡皮管，弹簧夹用无水酒精消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。

　　5.首先，加入3-4倍柱体的无血培养基平衡，之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡（上述培养基都要预热），zui后等培养基液面接近柱填料液面时，关闭弹簧夹。

　　6. 样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml，上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后，再加入少量培养液，然后关闭弹簧夹。

　　7.覆盖铝箔，垂直固定，置于消毒过的容器中，于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。

　　8. 从培养箱中拿出柱子，置于超净台内，除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管，加入适当体积经37℃预热的培养基，打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min，流出约5ml之后，流出的培养液基变得不透明，此时其中含有T细胞，收集这一部分培养基。

　　9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度，实际上，收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集，因为即使收集更多的量，回收率几乎不会增加。

　　10.上述操作后，细胞的回收率为： 15~20 %T细胞含量： 85~95 %B细胞污染率： 1 5 %多数细胞被确定为T细胞。

　　（注）收集粘附于尼龙毛上的细胞时，将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出，转移到适当的容器中，用镊子小心的将尼龙毛松开，粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射器芯插入注射器内，通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。

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